range. Fig. 2 presents the optimal chromatograms obtained with
the four stationary phases. Firstly, it is worth mentioning that the
elution order of non-epi and epi forms was identical for all investigated
columns and was in close agreement with previous studies
[36,37]. Indeed, epi forms with gallate (EGCG and ECG) were eluted
prior to non-epi forms with gallate (GCG and CG), and a non-epi
form without gallate (C) was eluted prior to non-epi forms without
gallate (EGC and EC).
Fig. 2A and B, which corresponds to the hybrid BEH C18 and
conventional C18 materials, depict a very similar chromatographic
profile obtained with close mobile phase conditions. The separation,
however, remained critical for both EC and EGCG (peaks
number 2 and 8) and also for CG and ECG (peaks number 4 and 5).
These results confirm that selectivity was too limited on these two
stationary phases and that the only way to attain a baseline separation
would be to increase efficiency by lengthening column. The
separation obtained with the phenyl BEH stationary phase (Fig. 2C)
was also not satisfactory as it was difficult to separate EC, GCG,
EGCG (peaks number 2, 7 and 8). There was also no resolution for
CG and ECG (peaks number 4 and 5). Finally, Fig. 2D presents the
separation achieved on the BEH RP18 support that contains a polar
embedded group. In this case, using a 13.3–22.2% ACN gradient
in 3.46 min gave a baseline separation with high selectivity and
a minimal resolution of 3.6 between of C and EC (peaks number 1
and 2). Additionally, the analysis time was quite short at less than
2min. The different separations provided confirmation that endcapped,
monomeric C18 columns are required for the separation
of the naturally occurring tea catechins as stated by Dalluge et al.
[35]. Furthermore, we also demonstrated that columns containing
a polar embedded group were beneficial to improve selectivity of
the structural isomer pairs of catechins. It is worth mentioning that
columns packed with larger particles but with the same chemical
properties (Waters Xterra RP18 or Xbridge shield RP18) can address
the issue of separation on conventional HPLC instrumentation and
generate strictly equivalent selectivity and resolving power with a
longer analysis time (data not shown).
3.1.2. Ultra-fast and highly efficient separations of catechins
One of the main advantages of UHPLC technology is related to
the possibility of attaining either ultra-fast or high resolving power
separations. Indeed, with the Van Deemter curves obtained for
columns packed with small particles [26] and the elevated backpressure
attainable (up to 1000 bar inUHPLCinstrumentation [22]),
it is possible to tune column geometry, the mobile phase flow rate
and other chromatographic conditions to attain fast or highly efficient
separations.
ช่วงนั้น Fig. 2 นำเสนอ chromatograms เหมาะสมรับกับ
ระยะเครื่องเขียน 4 ประการแรก มันเป็นน่ากล่าวถึงที่
สั่ง elution ของ epi และ epi ไม่ถูกเหมือนกันทั้งหมดสอบสวน
คอลัมน์ และในข้อตกลงปิดกับการศึกษาก่อนหน้านี้
[36,37] แน่นอน ฟอร์ม epi กับ gallate (EGCG และ ECG) ถูก eluted
ก่อนฟอร์มไม่ epi gallate (GCG และ CG), และไม่ใช่-epi
ฟอร์มโดยไม่มี eluted gallate (C) ก่อนฟอร์มไม่ epi โดย
gallate (EGC และ EC)
Fig. 2A และ B ซึ่งสอดคล้องกับไฮบริ C18 กลาง และ
ปกติวัสดุ C18 พรรณนาคล้าย chromatographic
โพรไฟล์ได้ ด้วยเงื่อนไขระยะปิดมือถือ แยก,
อย่างไรก็ตาม ยังคงสำคัญสำหรับทั้ง EC และ EGCG (ยอด
หมายเลข 2 และ 8) และ สำหรับ CG และ ECG (ยอดเลข 4 และ 5) .
ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันว่า วิธีถูกจำกัดเกินไปบนสอง
ระยะเครื่องเขียนและวิธีเดียวที่จะบรรลุแยกหลัก
จะเพิ่มประสิทธิภาพ โดยการเพิ่มความยาวของคอลัมน์ ใน
แยกรับ ด้วย phenyl กลางประจำระยะ (Fig. 2C)
ก็ยังไม่เป็นที่พอใจก็ยากที่จะแยก EC, GCG,
EGCG (ยอดจำนวน 2, 7 และ 8) นอกจากนี้ยังมีความละเอียดไม่สำหรับ
CG และ ECG (ยอดเลข 4 และ 5) สุดท้าย Fig. 2D แสดง
สำเร็จสนับสนุน RP18 กลางนั้นมีขั้วแยก
กลุ่มฝังตัว ในกรณีนี้ ใช้ไล่ ACN % 13.3–22.2
ใน 3.46 นาทีให้แยกหลัก ด้วยวิธีสูง และ
ความละเอียดน้อยที่สุดของ 3.6 ระหว่าง C และ EC (ยอดหมายเลข 1
2) นอกจากนี้ เวลาวิเคราะห์ค่อนข้างสั้นที่น้อยกว่า
2min ประโยชน์ต่าง ๆ ให้ยืนยันว่า endcapped,
คอลัมน์ C18 monomeric จะต้องแยก
ของ catechins ชาเกิดขึ้นตามธรรมชาติตามที่ระบุโดย Dalluge et al.
[35] นอกจากนี้ ยังว่าที่คอลัมน์ประกอบด้วย
กลุ่มฝังขั้วโลกมีประโยชน์เพื่อปรับปรุงวิธีของ
คู่ไอโซเมอร์โครงสร้างของ catechins คุ้มค่ากล่าวถึงที่
คอลัมน์บรรจุ ด้วยอนุภาคขนาดใหญ่ แต่ มีสารเคมีเหมือนกัน
คุณสมบัติ (Xterra RP18 น้ำหรือ Xbridge โล่ RP18) สามารถ
ออกแยกบนเครื่องมือ HPLC ธรรมดา และ
สร้างใวเหมือนอย่างเคร่งครัดและการแก้ไขไฟฟ้ากับการ
เวลาวิเคราะห์อีกต่อไป (ข้อมูลไม่แสดง) .
3.1.2 ได้ ประโยชน์พิเศษรวดเร็ว และมีประสิทธิภาพสูงของ catechins
หนึ่งในประโยชน์หลักของ UHPLC เทคโนโลยีเกี่ยวข้องกับ
ของการบรรลุเร็วทัน หรือสูงพลังงาน resolving
ประโยชน์ แน่นอน มีเส้นโค้ง Deemter แวนได้
คอลัมน์บรรจุ ด้วยอนุภาคขนาดเล็ก [26] และ backpressure สูง
ตาม (สูงสุด 1000 บาร์ inUHPLCinstrumentation [22]),
จำเป็นต้องปรับแต่งคอลัมน์เรขาคณิต อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่
และเงื่อนไขอื่น ๆ chromatographic บรรลุเร็ว หรือมีประสิทธิภาพสูง
ประโยชน์
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)