2.2.2. Liquid–liquid extraction pro

2.2.2. Liquid–liquid extraction procedure
Before the purification, all tea samples were filtered through
a nylon filter (0.45m×47 mm). Then, 10mL of the filtered tea
sample was extracted 3-fold with 10mL of organic solvent (ether,
butanol or ethyl acetate). After vigorous stirring, the two phases
were allowed to settle for couple of minutes. The aqueous layer
(lower part) was recovered in a glass flask and further analyzed. The
organic layer (upper part) was recovered and evaporated to dryness
using a nitrogen stream to avoid the peak broadening that is always
observed when a pure organic solvent is used for dilution purposes.
The dry residue was subsequently dissolved in pure water before
injection into the UHPLC system.
2.3. Instrumentation
2.3.1. UHPLC–UV experiments
UHPLC–UV experiments were performed on a Waters Acquity
UPLC system (Milford, MA, USA). This instrument included a binary
pumping system with a maximum flow rate of 2mL/min, an autosampler
with an injection loop volume of 2 or 5L used under full
loop conditions, a UV–vis programmable detector and a column
manager that included a column oven set at 30 ◦C. Data acquisition,
data handling and instrument control were performed using the
Empower Software v2.0. The UV detector time constant and data
sampling rate were adjusted and could vary between 25–100ms
and 20–80 Hz, respectively, to obtain signals of highest quality
even with ultra-fast separation. The detector wavelength was set
at 265nm as the best compromise to reach maximum absorbance
for the compounds of interest.
2.3.2. UHPLC–MS/MS experiments
UHPLC–MS/MS experiments were performed on the same
Waters ACQUITY UPLC system but hyphenated with a triple
quadrupole (TQD) mass spectrometer from Waters. The TQD operated
at a single mass resolution ofm/z 0.7 FWHM and possessed an
upper mass limit ofm/z 2000. The ESCi® ionization source was used
in the ESI negative mode, and ionization parameters, cone voltages
and collision energies were optimized by infusing each compound
(1g/mL) in 50:50 ACN:water plus 0.1% formic acid at a flow rate
of 600L/min. Optimal cone voltage and collision energies values
are summarized in Table 1. The capillary voltage and the source
extractor voltage were set at 3000 and 3V, respectively. The source
temperature was maintained at 140 ◦C, the desolvatation gas temperature
and flow at 400 ◦C and 800 L/h, respectively, and the cone
gas flow at 50 L/h. MS/MS detection was carried out in the SRM
mode, and the transitions are also indicated in Table 1. The collision
gas flow was set at 0.2 mL/min of argon, and the entrance
and exit potentials were adjusted to 1 and 0.5 V, respectively. Data
acquisition, data handling and instrument control were performed
using the Masslynx v4.1 software.
2.3.3. Stationary phases
Separations were carried out on various analytical columns: a
Hypersil Gold C18 (50mm×2.1mm ID, 1.9m) column provided
by Thermo Fisher Scientific (Runcorn, UK), an Acquity BEH C18
(50mm×2.1mm ID, 1.7m) column, an Acquity BEH Shield RP18
(50, 100 and 150mm×2.1mm ID, 1.7m) column and an Acquity
BEH phenyl (50mm×2.1mm ID, 1.7m) column. All of these
columns were provided by Waters. The solvent system A = 0.1 vol.%
formic acid−water; B = 0.1 vol.% formic acid−acetonitrile was
used in the entire study.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.2 ของเหลวโ€ "ขั้นตอนการสกัดของเหลว
ก่อนที่จะฟอกตัวอย่างชาทั้งหมดถูกกรองผ่านตัวกรอง
ไนลอน (0.45 ม. ร -47 มม. ) แล้ว 10ml ของชา
ตัวอย่างการกรองการสกัด 3 เท่าด้วย 10ml ของตัวทำละลายอินทรีย์ (อีเทอร์บิวทานอ
หรือเอทิลอะซิเตท) หลังจากตื่นเต้นแข็งแรงทั้งสองขั้นตอน
ได้รับอนุญาตให้ชำระสำหรับไม่กี่นาที ชั้นน้ำ
(ส่วนล่าง) ได้รับการกู้คืนในขวดแก้วและต่อไปการวิเคราะห์
ชั้นอินทรีย์ (ส่วนบน) ได้รับการกู้คืนและการระเหยแห้ง
โดยใช้กระแสไนโตรเจนเพื่อหลีกเลี่ยงการขยายจุดสูงสุดที่อยู่เสมอ
สังเกตเมื่อตัวทำละลายอินทรีย์บริสุทธิ์ถูกนำมาใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการลดสัดส่วน.
แห้งที่เหลือก็เลือนหายไปต่อมาในน้ำบริสุทธิ์ ก่อน
การฉีดเข้าไปในระบบ uhplc.
2.3 เครื่องมือ
2.3.1"การทดลองยูวี
uhplc โ€" โ€ uhplc ทดลองยูวีได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับน้ำ Acquity
ระบบ UPLC (ฟอร์ด ma, usa) เครื่องมือนี้รวมถึงไบนารี
ระบบสูบน้ำที่มีอัตราการไหลสูงสุดของ 2ml/min, autosampler
ด้วยปริมาณห่วงฉีด 2 หรือ 5 ลิตรใช้ภายใต้เงื่อนไข
เต็มวงยูวีโ€ "กำลังตรวจจับโปรแกรมและคอลัมน์
ผู้จัดการที่รวมคอลัมน์ตั้งเตาอบที่ 30 โ - ฆคเก็บข้อมูล
จัดการข้อมูลและการควบคุมที่ใช้ในการได้รับการดำเนินการโดยใช้ v2.0
ซอฟต์แวร์เสริมพลัง เวลาเครื่องตรวจจับยูวีอย่างต่อเนื่องและข้อมูล
อัตราการสุ่มตัวอย่างที่ถูกปรับเปลี่ยนและอาจแตกต่างกันระหว่าง 25-100ms
และ 20-80 Hz, ตามลำดับที่จะได้รับสัญญาณที่มีคุณภาพสูง
แม้จะมีการแยกที่รวดเร็ว ความยาวคลื่นเครื่องตรวจจับได้ถูกจัดตั้ง
ที่ 265nm เป็นประนีประนอมที่ดีที่สุดที่จะไปถึงการดูดกลืนแสงสูงสุด
สารประกอบที่น่าสนใจ.
2.3.2 uhplc-ms/ms
ทดลองการทดลอง uhplc-ms/ms ได้ดำเนินการในระบบ UPLC
น้ำ Acquity เดียวกัน แต่ด้วยยัติภังค์สาม
quadrupole (TQD) สเปกโตรมิเตอร์มวลจากน้ำ TQD ดำเนิน
ที่ความละเอียดเดียวมวล OFM / ซี 0.7 fwhm และครอบครอง
บนมวล จำกัด OFM / ซี 2000 esci แหล่งไอออนไนซ์®ถูกใช้
ในโหมดลบ esi,ไอออนไนซ์และพารามิเตอร์กรวย
แรงดันไฟฟ้าและพลังงานของการชนกันได้รับการปรับให้เหมาะสมโดยการผสมผสานระหว่างแต่ละสารประกอบ
(1 g / ml) ใน ACN 50:50: น้ำบวกกรด 0.1% ที่อัตราการไหล
600 ลิตร / นาที แรงดันไฟฟ้ารูปกรวยที่ดีที่สุดและการชนกันพลังงานค่า
ได้สรุปไว้ในตารางที่ 1 แรงดันของเส้นเลือดฝอยและแรงดันไฟฟ้าที่แหล่ง
ระบายที่ตั้งอยู่ที่ 3000 และ 3v ตามลำดับ แหล่ง
อุณหภูมิที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 140 ◦ C, อุณหภูมิ desolvatation
ก๊าซและการไหลที่ 400 ◦ C และ 800 ลิตร / ชั่วโมงตามลำดับและกรวย
การไหลของก๊าซที่ 50 ลิตร / ชม. ตรวจสอบ ms / มิลลิวินาทีได้รับการดำเนินการใน SRM
โหมดและการเปลี่ยนที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ชน
ไหลของก๊าซตั้งอยู่ที่ 0.2 มล. / นาทีของอาร์กอนและทางเข้าและออกจาก
ศักยภาพถูกปรับ 1 และ 0.5 v ตามลำดับ ข้อมูล
ซื้อ, การจัดการข้อมูลและการควบคุมเครื่องมือได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์
v4.1 masslynx.
2.3.3 เฟส
แยกถูกดำเนินการในการวิเคราะห์ต่างๆคอลัมน์:
c18 hypersil ทอง (50mm ร-2.1mm ID, 1.9 เมตร) คอลัมน์ให้
โดยเทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ (รันคอร์น, สหราชอาณาจักร), Beh c18 Acq​​uity
(50mm ร - 2.1mm ID, 1.7 เมตร) คอลัมน์ RP18 Acq​​uity โล่ Beh
(50, 100 และ 150 มม. ร-2.1mm ID, 17 เมตร) และคอลัมน์ phenyl Acquity
Beh (50mm ร-2.1mm ID, 1.7 เมตร) คอลัมน์ สิ่งเหล่านี้
คอลัมน์ได้โดยน้ำ ตัวทำละลายระบบ = 0.1 โวล%
ฟอร์มิกรดโ. น้ำข. = 0.1 โวล% กรดฟอร์มิโ '
acetonitrile ถูกใช้ในการศึกษาทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.2 การ Liquid–liquid ขั้นตอนสกัด
ก่อนฟอก ตัวอย่างชาทั้งหมดที่ถูกกรองผ่าน
กรองไนลอน (0.45 m × 47 mm) ชาที่กรองแล้ว 10mL
ถูกสกัดอย่าง 3-fold กับ 10mL ของตัวทำละลายอินทรีย์ (อีเทอร์,
บิวทานอหรือเอทิล acetate) หลังจากกวนคึกคัก ระยะสอง
ได้รับอนุญาตให้ชำระในสองสามนาที ชั้นอควี
(ส่วนล่าง) ถูกกู้คืนในหนาวแก้ว และวิเคราะห์เพิ่มเติม
ชั้นอินทรีย์ (ส่วนบน) ถูกกู้คืน และหายไปกับความแห้งกร้าน
กระแสไนโตรเจนให้หลีกเลี่ยงช่วง peak broadening ที่เป็นเสมอ
สังเกตเมื่อใช้ตัวทำละลายอินทรีย์บริสุทธิ์สำหรับเจือจางเพื่อวัตถุประสงค์การ
ตกค้างแห้งได้ในเวลาต่อมาละลายในน้ำบริสุทธิ์ก่อน
ฉีดเข้าระบบ UHPLC
2.3 ใช้เครื่องมือ
2.3.1 ทดลอง UHPLC–UV
UHPLC–UV ทดลองดำเนินบน Acquity น้ำ
UPLC ระบบ (ลฟอร์ด MA สหรัฐอเมริกา) เครื่องมือนี้รวมไบนารี
สูบระบบ ด้วยอัตราไหลสูงสุด 2mL/min, autosampler การ
กับไดรฟ์ข้อมูลแบบวนฉีด 2 หรือ 5 L ใช้ภายใต้เต็ม
วนเงื่อนไข เครื่องตรวจจับโปรแกรม UV–vis และคอลัมน์
ที่รวมคอลัมน์เตาอบตั้ง 30 ◦C ข้อมูลซื้อ,
การจัดการข้อมูลและเครื่องมือควบคุมที่ดำเนินการโดยใช้การ
v2.0 อำนาจซอฟต์แวร์ ค่าคงเวลาของเครื่องตรวจจับ UV และข้อมูล
อัตราการสุ่มตัวอย่างได้ปรับปรุง และอาจแตกต่างกันระหว่าง 25–100ms
และ 20–80 Hz ตามลำดับ รับสัญญาณคุณภาพสูง
กับแยกรวดเร็วทันการ ตั้งค่าความยาวคลื่นจับ
ที่ 265nm เป็นปัญหาสุดถึง absorbance สูงสุด
สำหรับสารประกอบของดอกเบี้ย
2.3.2 ทดลอง UHPLC–MS/MS
UHPLC–MS/MS ทดลองดำเนินบนเหมือน
ระบบน้ำ ACQUITY UPLC แต่เชื่อมต่อกับทริปเปิ้ลเป็น
quadrupole (TQD) โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์จากน้ำ ดำเนินการใน TQD
ที่มีความละเอียดโดยรวมเดียว ofm/z 0.7 FWHM และต้องการ
ofm z 2000 จำกัดโดยรวมด้านบน ใช้แหล่ง ESCi ® ionization
ในโหมดลบ ESI และ ionization พารามิเตอร์ cone แรงดัน
และพลังงานการชนถูกปรับ โดย infusing แต่ละสารประกอบ
(1 g/mL) ในคนละครึ่ง ACN:water บวก 0.1% กรดที่อัตราการไหล
ของ 600 L/นาที Optimal cone ค่าพลังงานแรงดันและชน
สรุปในตารางที่ 1 แรงดันในเส้นเลือดฝอยและต้น
ระบายแรงดันมีการตั้งค่าที่ 3000 และ 3V ตามลำดับ ต้น
อุณหภูมิเก็บรักษาที่ 140 ◦C อุณหภูมิก๊าซ desolvatation
และลำดับที่ 400 ◦C และ 800 L/h ตามลำดับ และกรวย
แก๊สกระแสใน 50 L/MS/MS ตรวจถูกดำเนินใน SRM h.
โหมด และการเปลี่ยนจะยังแสดงในตารางที่ 1 ชน
ตั้งกระแสก๊าซที่ 0.2 mL/min ของอาร์กอน และทางเข้า
ศักยภาพออกถูกปรับ 1 และ 0.5 V ตามลำดับ ข้อมูล
ซื้อ การจัดการข้อมูล และเครื่องมือควบคุมดำเนิน
ใช้ Masslynx v4.1 ซอฟต์แวร์.
2.3.3 ระยะเครื่องเขียน
ประโยชน์ถูกดำเนินการบนคอลัมน์ต่าง ๆ วิเคราะห์: การ
C18 ทอง Hypersil (50 มม. × 2 มม. 1 ID, 1.9 m) คอลัมน์ให้
โดยเทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ (Runcorn, UK), C18 เป็นกลาง Acquity
(50 มม. × 2 มม. 1 ID, 1.7 m) คอลัมน์ การ Acquity กลางโล่ RP18
(50, 100 และ 150 มม. × 2 ID มม. 1, 17 m) คอลัมน์และการ Acquity
phenyl กลาง (50 มม. × 2 1 mm ID, 1.7 m) คอลัมน์ ทั้งหมดนี้
คอลัมน์ที่ได้จากน้ำทะเล ระบบตัวทำละลาย A = 0.1 vol.%
formic acid−water B = 0.1 vol.% formic acid−acetonitrile ถูก
ใช้ในการศึกษาทั้งหมด