A real sample of diluted tea extract was injected into the system
to highlight the elevated selectivity of the MS device. Initially,
the detector was used as a single quadrupole instrument operating
in the SIM mode, and the chromatogram is reported in Fig. 7B.
Under these conditions, numerous contaminants were observed on
all channels, particularly for the corresponding m/z ratio of EGCG
and ECG, and this led to limited sensitivity and selectivity. The low
sensitivity and selectivity can obviously be attributed to the low
resolution of the single quadrupole instrument, which is around
0.7–1 FWMH. The same tea extract sample was also analyzed with
an MS instrument operating in the tandem mode. As observed in
Fig. 7C, the selectivity was significantly improved, and the qualitative
discrimination of each catechinwasvery straightforward based
on their retention time and MS/MS transitions. Under these conditions,
the sensitivity was excellent with signal-to-noise higher
than 500 for AC in the 10-fold diluted tea sample. Only a contaminant
peak at 0.99 min was observed for the transition of EGC,
but this peak possessed a different retention time from that of
peak number 6. Similarly to the LLE–UHPLC–UV, it is also possible
to establish a qualitative ranking between the different catechins
present in our commercial tea sample using the UHPLC–MS/MS
method. The abundance of catechins can now confidently be classified
as follow: EGC > EC >EGCG> ECG>C>CG>GCG, by comparing
the chromatogram of tea extract with that of standard catechins in
pure water.
4. Concluding remarks
The aim of this study was to show the possible benefits of using
columns packed with sub-2-m particles in ultra-high pressure
conditions (UHPLC) for the qualitative determination of various catechin
derivatives in tea extracts. After a careful selection of the most
appropriate column chemistry (Acquity BEH Shield RP18), it was
demonstrated that the separation of eight standard polyphenols
could be achieved in about 30 s while maintaining sufficient resolution.
When dealing with complex matrices such as tea extracts,
however, which could possess hundreds of constituents, the resolving
power becomes more important than throughput. For this
reason, longer columns have been tested, and a good compromise
was obtained with a 100-mm column using a gradient from 13%
to 22.2% ACN in 7.05 min. In real tea extracts, the unambiguous UV
identification of catechins always remains tedious, and quantitation
also remains critical.
For this reason, two procedures involving 2-D experiments were
implemented. On the one hand, the complexity of tea extract samples
was reduced with the help of a simple, rapid purification
procedure. A liquid–liquid extraction with ethyl acetate as the
organic solvent was employed prior to the UHPLC–UV analysis, and
this demonstrated some evident benefits for catechin determination.
On the other hand, UHPLC was coupled to MS/MS detection
to attain a sufficient sensitivity and selectivity between catechin
derivatives and other constituents of the tea extract sample. This
strategy was found to be extremely well suited as selectivity
remains excellent in theSRMmode even with complex tea extracts.
As shown in this paper, the two proposed strategies,
namely LLE–UHPLC–UV (gold standard for routine analysis) and
UHPLC–MS/MS, are very useful for an unambiguous qualitative
determination of catechins in tea. A study about quantitation of
catechins in tea by these two approaches is under way.
ตัวอย่างจริงของสารสกัดใบชาแตกออกถูกฉีดเข้าไปในระบบ
เน้นวิธียกระดับอุปกรณ์ MS เริ่มแรก,
ใช้เครื่องตรวจจับเป็นแบบ quadrupole เดียวเครื่องมือปฏิบัติ
ใน SIM โหมด และ chromatogram ได้รายงานใน Fig. 7B
ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ สารปนเปื้อนต่าง ๆ ได้สังเกตบน
ช่องทั้งหมด โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับอัตราส่วน m/z สอดคล้องกันของ EGCG
และ ECG และนี้นำไปสู่การจำกัดความใวและ ต่ำสุด
เกิดความใวและสามารถเห็นได้ชัดจากต่ำสุด
ตรา quadrupole เดียว ซึ่งเป็นสถานที่ความละเอียด
0.7–1 FWMH ตัวอย่างสารสกัดจากชาเดียวยังถูกวิเคราะห์ด้วย
MS เครื่องมือทำงานในโหมดตัวตามกันไป เท่าที่สังเกตใน
Fig. 7C วิธีการได้มากขึ้น การจริยธรรม
แบ่งแยกของแต่ละ catechinwasvery ตรงไปตรงมาตาม
ผู้รักษาเวลาและ MS/MS เปลี่ยน ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้,
ความไวการรับ ด้วยสัญญาณสัญญาณเสียงรบกวนสูง
กว่า 500 สำหรับ AC ในตัวอย่างชาแตกออก 10-fold เฉพาะสารปนเปื้อน
พีคที่ต่ำสุด 0.99 ถูกตรวจสอบสำหรับการเปลี่ยนแปลงของ EGC,
แต่ช่วงนี้ต้องมีเวลาเก็บข้อมูลแตกต่างจาก
หมายเลขสูงสุด 6 ในทำนองเดียวกัน กับ LLE–UHPLC–UV มันเป็นไปได้
สร้างการจัดอันดับคุณภาพระหว่าง catechins ต่าง ๆ
แสดงในตัวอย่างชาพาณิชย์ของเราใช้ UHPLC–MS/MS
วิธีการ มาย catechins สามารถเชื่อมั่นแบ่ง
ดังต่อไปนี้: EGC > EC > EGCG > ECG > C > CG > GCG โดยเปรียบเทียบ
chromatogram ของชาแยกกับที่มาตรฐาน catechins ใน
น้ำบริสุทธิ์ได้
4 สรุปข้อสังเกต
จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือการ แสดงประโยชน์ของการใช้ได้
คอลัมน์บรรจุ ด้วยอนุภาคย่อย 2 m ในความดันสูง
เงื่อนไข (UHPLC) สำหรับการกำหนดคุณภาพของสารสกัดต่าง ๆ จาก
อนุพันธ์ในสารสกัดจากชา หลังจากเลือกที่ระวังที่สุด
การเคมี (Acquity กลางโล่ RP18), ถูก
แสดงที่แบ่งแยกโพลีฟีนมาตรฐาน 8
สามารถทำได้ในประมาณ 30 s ขณะที่ยังคงความละเอียดเพียงพอได้
เมื่อจัดการกับเมทริกซ์คอมเพล็กซ์เช่นสารสกัดจากชา,
อย่างไรก็ตาม ซึ่งอาจมีหลายร้อย constituents การแก้ไข
พลังงานเป็นสำคัญมากกว่าอัตราความเร็วได้ นี้
เหตุผล คอลัมน์ยาวได้รับการทดสอบ และประนีประนอมดี
กล่าวกับคอลัมน์ 100 มม.ใช้ไล่จาก 13%
22.2% ACN ใน 7.05 min ในสารสกัดจากชาจริง UV ชัดเจน
รหัสของ catechins เสมอยังคงน่าเบื่อ และการวิเคราะห์หาปริมาณ
ยัง ยังคงสำคัญ.
สำหรับเหตุผลนี้ ถูกขั้นตอนสองที่เกี่ยวข้องกับการทดลอง 2 D
ใช้ คง ความซับซ้อนของชาสกัดตัวอย่าง
ถูกลด โดยใช้ง่าย ฟอกอย่างรวดเร็ว
กระบวนการ สกัด liquid–liquid กับเอทิล acetate เป็น
ตัวทำละลายอินทรีย์ถูกจ้างก่อนการวิเคราะห์ UHPLC–UV และ
นี้แสดงประโยชน์บางประการที่เห็นได้ชัดสำหรับสารสกัดจากกำหนด
บนมืออื่น ๆ UHPLC ถูกควบคู่การตรวจจับของ MS/MS
บรรลุความเพียงพอความใวและระหว่างสารสกัดจาก
ตราสารอนุพันธ์และอื่น ๆ constituents ชาสกัดตัวอย่าง นี้
พบกลยุทธ์ให้เหมาะสมเป็นวิธีดีมาก
ยังคงยอดเยี่ยมใน theSRMmode แม้ว่าจะมีสารสกัดจากชาซับซ้อน
ตามที่แสดงในเอกสารนี้ สองเสนอกลยุทธ์,
ได้แก่ LLE–UHPLC–UV (มาตรฐานทองคำสำหรับวิเคราะห์ประจำ) และ
UHPLC–MS/MS มีประโยชน์มากสำหรับการเกี่ยวคุณภาพ
ความมุ่งมั่นของ catechins ในชา การศึกษาเกี่ยวกับการวิเคราะห์หาปริมาณ
catechins ในชาด้วยกันสองวิธีเหล่านี้จะอยู่
การแปล กรุณารอสักครู่..