Registram-se as primeiras análises por coloração convencional de Giemsa, impregnação com nitrato de prata das regiões de organizadores nucleolares (Ag-NOR) e hibridização fluorescente in situ (FISH) realizados em Ophisternon aenigmaticum proveniente da Ilha de Margarita, Venezuela. Foram encontrados dois cariotipos: C1, 2n=46, composto de seis cromossomas metaméricos de tamanho médio, dois subtelocêntricos e 38 acrocêntricos; e C2, 2n=45, composto de um cromossoma metacêntrico grande e cinco metacêntricos médios, um subtelocêntrico e 38 acrocêntricos. No cariotipo C1 os cistrons ribossomais maiores (rADN) se localizam na posição terminal dos braços curtos do primeiro par metacêntrico, determinado por Ag-NOR e FISH com a sonda 18S rADN. No cariotipo C2, a coloração prateada somente mostrou um sinal positivo em um cromossoma simples do par 1, enquanto que FISH com a sonda 18S r ADN hibridizou em dois cromossomas diferentes: um coincidente com o Ag-NOR (par 1) e outro em um cromossoma acrocêntrico, sugerindo a ocurrência de uma inversão pericêntrica. Em ambos cariotipos, FISH com sonda 5S rADN produziu sinais de hibridação em posição subtelomêrica do braço curto do par de cromossomas Nº 3. Discute-se a evolução cromossômica em Synbrachidae.