对提取的基因进行下游分析、聚合酶链反应和限制性消化的检测。PCR是在50μ体积,进行包括:25μL 2×Taq PCR Master Mix(转基因),1μ我晚上10点/μl每个引物,5μL 10毫微克/μL基因组DNA和18μL消毒水。为Rubisco大亚基基因的引物(RbCl)是作为rbcl-f(5′- aatcttctactggtac - atggac-3′)和rbcl-r(5′- tcatcatctttggtaaaatcaag-3′)(洛杉矶et al.,2005)。预期的PCR扩增产物为433 bp ~ rbcL基因。放大程序包括一个初始变性在94°C 5 min 40次30秒94°C变性,40的在54°C引物退火,60在72°C在72°C 7分钟消化酶和DNA合成和最终扩展延伸被设置为一个总体积的20μL(4小时37°C)含有:1μg DNA,2μL 10×H缓冲(Takara公司,大连,中国),和1μL I(15单位/μL)(Takara公司,大连,中国)。
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